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普利萊組織細胞總蛋白抽提試劑盒p1250得到的蛋白要怎麽用

蛋白提取試劑盒分離亞細胞器後,怎麽驗證蛋白純度1.前處理把蛋白質從原來的組織或溶解狀態釋放出來,保持原來的天然狀態,並不丟失生物活性。常用的方法:勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等。超聲波破碎法:當聲波達到一定頻率時,使液體產生空穴效應使細胞破碎的技術。超聲波引起的快速振動使液體局部產生低氣壓,這個低氣壓使液體轉化為氣體,即形成很多小氣泡。由於局部壓力的轉換,壓力重新升高,氣泡崩潰。崩潰的氣泡產生一個振動波並傳送到液體中,形成剪切力使細胞破碎。2.粗分級分離可用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大,3.細分級樣品的進一步純化。樣品經粗分離以後,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去。進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最後的純化步驟。結晶是最後的一步分離純化的方法:1.分子大小;2.溶解度;3.電荷;4.吸附性質;5.對配體分子的生物親和力等。(一)根據分子大小不同的純化方法1.透析利用蛋白質分子不能通過半透膜,使蛋白質和其它小分子物質如無機鹽、單糖等分開。2.密度梯度離心。蛋白質顆粒的沉降係數不僅決定於它的大小,而且也取決於它的密度。3.凝膠過濾利用蛋白質分子大小,因為凝膠過濾所用的介質是凝膠珠,其內部是多孔的網狀結構。當不同的分子大小的蛋白質分子流過凝膠層析柱時,比凝膠珠孔徑大的分子進入珠內的網狀結構,而被排阻在凝膠珠之外隨溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動並最先流出柱外,比網孔小的分子能不同程度底自由出入凝膠珠的內外,由於不同大小的分子所經路徑不同而得到分離。大分子先被洗脫下來。小分子後被洗脫(二)利用溶解度差別的純化方法1.等電點沉澱和PH的控製蛋白質處於等電點時,其淨電荷為零,由於相鄰蛋白質分子之間沒有靜電斥力而聚集沉澱。因此在其他條件相同時,它的溶解度達到最底點,利用等電點分離蛋白質是一種常用的方法。2.蛋白質的鹽溶和鹽析中性鹽可以增加蛋白質的溶解度,這種現象稱為鹽溶。鹽溶作用是由於蛋白質分子吸附某種鹽類離子後,帶電層使蛋白質分子彼此排斥,而蛋白質分子與水相互作用加強了,因而溶解度增加當溶液的離子強度增加到一定數值時,蛋白質的溶解度開始下降。當離子強度足夠高時,很多蛋白質可以從水溶液中沉澱出來,這種現象稱為鹽析。鹽析作用的主要原因是大量中性鹽的加入使水的活性降低,原來溶液的大部分甚至全部的自由基水轉變成鹽離子的水化水

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